Estandarización de una prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa Transcriptasa Reversa en tiempo real para Virus Chikungunya

Resumen

Introducción: Desde la introducción en América de Virus Chikungunya (CHIKV) en el 2013, se ha convertido en un problema de salud pública en el mundo por la morbilidad y la carga económica que genera. El diagnóstico de laboratorio es una herramienta vital en la evaluación de la enfermedad y de las posibles complicaciones, así como en la vigilancia de la infección en el vector. Objetivo: Estandarizar una técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa Transcriptasa Reversa (RT-PCR) en tiempo real para la detección de CHIKV. Materiales y métodos: Se obtuvieron muestras sanguíneas de personas con fiebre y exantema residentes en el Área Metropolitana de Bucaramanga. Se hizo extracción de RNA viral con estuche de Qiagen. Se probaron tres técnicas reportadas en literatura, de RT-PCR en tiempo real SYBR Green One-Step, la de Ho que amplifica un fragmento del gen de la proteína nsP2 y las de Ummul y Agarwal del gen de la proteína E1. Se usó el equipo StepOnePlus de Applied Biosystem. Resultados: En una muestra se detectó CHIKV por las técnicas de Ummul (Ct 27,14) y de Agarwal (Ct 26,78). Ho mostró resultados inespecíficos (Ct 35,85 y 36,97). Conclusiones: Las técnicas que permitieron detectar CHIKV fueron Ummul y Agarwal, siendo congruente con los límites de detección reportados en la literatura (4,12 x 100 copias RNA/ml y 100 copias/25ml, respectivamente). Considerando lo reportado por Ho se asume que la cantidad de RNA viral presente en la muestra es menor al detectado por esta técnica (102 PFU/ml).